哈希分光光度計采用空間分隔雙光束、非對稱垂直式測量光路技術(shù),相對傳統(tǒng)的雙光束技術(shù)而言,因光路簡捷使儀器的結(jié)構(gòu)亦隨之簡化,可靠性大為提高。不僅光譜帶寬、波長精度符合包括藥典在內(nèi)的各藥典的要求,更有為滿足采用相關(guān)法規(guī)進(jìn)行控制的GLP/GMP程序控制功能。
它的基本原理是溶液中的物質(zhì)在光的照射激發(fā)下,產(chǎn)生了對光的吸收效應(yīng),物質(zhì)對光的吸收是選擇性的,各種不同的物質(zhì)都具有其各自的吸收光譜,因此當(dāng)某單色光通過溶液時,其能量就會被吸收而減弱,光能量減弱的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系,即符合朗伯-比爾定律。
按照光源種類劃分,哈希分光光度計可分為以下幾類:
1、比例雙光束UV,測試過程全封閉,單光束光源通過光柵,再經(jīng)棱鏡,分成2束UV,分別照射目標(biāo)樣品與空白樣品,再合并光進(jìn)入光電倍增管檢測器檢測,經(jīng)差減法得到結(jié)果。目標(biāo)樣品與空白樣品可以同時測量,測試靈敏度降低,全波段分析時間長。
2、傳統(tǒng)單光束UV紫外測試,測試過程全程封閉,單光束光源只通過光柵直接照射樣品,再經(jīng)光電倍增管檢測器檢測。測試空白樣品之后才能測試目標(biāo)樣品,全波段需要時間較長為2min;
3、全波段UV:樣品與空白樣品可以暴露在空氣中,照射樣品后,進(jìn)入密閉箱,通過光柵,進(jìn)入DAD檢測器檢測。檢測樣品不需要密閉,外界光線對測試無影響,使用方便準(zhǔn)確且空白只需要檢測一次,全波段分析時間小于1s。
4、雙光束UV:與比例雙光束UV不同之處是通過棱鏡分出兩道光后,在分別通過光柵,各自分別進(jìn)入光點倍增管檢測器檢測。加強(qiáng)了靈敏度,同時保留同時測量空白樣品與目標(biāo)樣品的優(yōu)點,全波段分析時間長。